So funktionieren ELISA-Kits
Jun 05, 2019
Doppelte Antikörper-Sandwich-Methode 1. Paket: Mit 0,05 MPH9. Die Carbonatpackung ist gepuffert, um den Antikörper auf einen Proteingehalt von 1 bis 10 µg/ml zu verdünnen. Geben Sie 0,1 ml bei 4 °C über Nacht in die Reaktionslöcher jeder Polystyrolplatte. Entsorgen Sie am nächsten Tag die Lösung im Loch und waschen Sie sie dreimal jeweils 3 Minuten lang mit Waschpuffer.
(kurz Waschen, das Gleiche unten). 2. Probe hinzufügen: Eine bestimmte Verdünnung der zu testenden Probe (0,1 ml) in das oben-verpackte Reaktionsloch geben, 1 Stunde bei 37 °C inkubieren. Anschließend waschen.
(Gleichzeitig leeres Loch, negatives Kontrollloch und positives Kontrollloch machen). 3. Mit Enzym-markierte Antikörper hinzufügen: In jedes Reaktionsloch einen frisch verdünnten, mit Enzym-markierten Antikörper (Verdünnung nach der Titration) 0,1 ml hinzufügen.
0,5 bis 1 Stunde bei 37 °C inkubieren und waschen.
4. Fügen Sie der Farbanzeige des flüssigen Substrats eine temporäre Zubereitung von 0,1 ml TMB-Substratlösung bei 37 °C für 10 bis 30 Minuten in jedes Reaktionsloch hinzu.
5. Endreaktion: 0,05 ml 2M Schwefelsäure zu jedem Reaktionsloch hinzufügen. 6. Ergebnisse bestimmen: Kann auf einem weißen Hintergrund direkt mit bloßem Auge beobachtet werden, um die Ergebnisse zu beobachten: Je dunkler die Farbe im Reaktionsloch, desto stärker der positive Grad, die negative Reaktion ist farblos oder sehr flach, je nachdem, welche Farbe sich in der Tiefe widerspiegelt, bis zur Farbe des
OD-Wert gescannt: Auf dem ELISA-Tester bei 450 nm (bei BTS-Farbwiedergabe dann 410 nm), um den OD-Wert jedes Lochs zu messen, um den OD-Wert jedes Lochs zu messen, wenn er 2,1-mal größer als der angegebene OD-Wert der Negativkontrolle ist, also positiv.
Indirektes Recht
1. Verwenden Sie die zu puffernde Packung, um das bekannte Antigen auf 1 bis 10 mg/ml pro Loch plus 0,1 ml bei 4 °C über Nacht zu verdünnen.
2. Am nächsten Tag dreimal waschen;
3. Eine bestimmte Verdünnung der Probe (unbekannter Antikörper) (0,1 ml) in das oben erwähnte verpackte Reaktionsloch geben, 1 Stunde bei 37 °C inkubieren, waschen;
4. (sowohl Leer- als auch Negativ- und Positivlochkontrolle) in das Reaktionsloch einen frisch verdünnten enzymmarkierten zweiten Antikörper (Anti--Antikörper) 0,1 ml geben;
5,37 °C Inkubation 35–60 Minuten, Waschen;
6. „Das letzte Mal, als Sie mit DDW gewaschen haben.“ Die übrigen Schritte sind die gleichen wie bei der „Doppel-Antikörper-Sandwich-Methode“ von 4, 5, 6.